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不同类型的HPLC色谱柱
日期:2024-09-30 04:28
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摘要:色谱柱是HPLC的主要成分,因为色谱柱负责分离样品成分。样品与流动相一起通过色谱柱,从色谱柱中分离出其组分。
通常,硅胶填充在高效液相色谱柱中,因为其粒径和孔隙率有助于成分分离,并且硅胶也是一种惰性材料,不会与流动相发生反应。因此,硅胶柱可用于分析不同化学性质的化合物。填充在HPLC柱中的物质称为固定相。
通常,硅胶填充在高效液相色谱柱中,因为其粒径和孔隙率有助于成分分离,并且硅胶也是一种惰性材料,不会与流动相发生反应。因此,硅胶柱可用于分析不同化学性质的化合物。填充在HPLC柱中的物质称为固定相。
高效液相色谱柱及其分离技术
根据色谱柱的组成和分离方法,有以下不同类型的色谱柱。1) 正相柱
2) 反相柱
3) 离子交换柱
4) 大小排除列
1) 什么是正相高效液相色谱柱:
这种色谱柱的极性固定相比流动相多。色谱柱的填料应比流动相更具极性,且该条件由极性材料二氧化硅实现。但水的极性比二氧化硅强,因此不使用水,而使用二氯甲烷、己烷和氯仿或它们与乙醚的混合物作为流动相。
样品组分的分离基于样品组分的极性。极性越高的样品组分与极性固定相的相互作用越大,导致与极性较低的流动相相互作用的极性较小的组分分离。硅胶柱广泛应用于药 物分析。使用正相色谱柱的色谱柱填料称为正相色谱。
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2) 什么是反相高效液相色谱柱:
在名称所述的反向相位列中,它与正常相位列相反。与极性较高的流动相相比,它具有非极性或极性较低的固定相。在反相色谱柱中,键合烃(如C8和C18)和其他非极性烃用作固定相,而有机水溶液(如水-甲醇或水-乙腈混合物)用作流动相。
反相色谱柱中样品组分的分离也是基于样品组分的极性进行的,但其发生与正相HPLC柱正好相反,因此,这种色谱被称为反相色谱。
3) 什么叫离子交换HPLC柱:
使用这些色谱柱分析容易电离的化合物。这些色谱柱中的固定相保持酸性或碱性,带有正负电荷,而流动相为极性液体,如水溶液中的盐溶液。分子的分离是基于分子与带电固定相之间的吸引离子力而发生的。由于样品组分分离过程中的离子交换,称为离子交换色谱法。
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4)为什么在实验过程中有 尺寸排除HPLC柱:
这些色谱柱中的多孔固定相允许根据组分的大小进行分离。多糖和二氧化硅等聚合物的组合用作这些色谱柱中的固定相。小分子渗透到固定相的孔隙中,而大分子部分渗透到孔隙中。因此,样品中的大分子比小分子先洗脱,这种色谱法称为尺寸排除色谱法。这些色谱柱通常不用于药 物化合物的分析。
HPLC柱的长度不同,从30 mm到250 mm不等,其粒径或孔隙率为3µ到5µ。这些因素影响样品分析,因此,在HPLC分析方法开发过程中,这些因素被认为是重要的。根据待分析化合物的性质和流动相选择色谱柱。通常在1000次运行后或根据需要,还应不时评估柱性能。