请检查我们针对不同固定相( 建议的再生程序, RP、NP、离子交换等 ) 并在这些程序后执行 CoA 色谱柱测试,如果原始压力恢复,以评估色谱柱性能/峰对称性。
1.清洗和再生程序
如果足够小心,就可以在很长一段时间内保持柱效和可靠性。 本节旨在提供有关有助于延长 HPLC 色谱柱寿命的不同程序的信息。
2.清洁与再生的区别
我们通常假设,分离后,柱或筒中*初存在的所有物质都已洗脱。运行后,在开始新的分离之前,用2-3柱体积的初始溶剂混合物清洗色谱柱。 但是,如果流动相成分的强度不足以在常规运行期间将其洗脱,则一些强烈保留在色谱柱上的杂质将在进样口处积聚。 发生这种情况时可能会出现一些不可忽视的问题:性能损失、背压增加、峰拖尾、保留时间偏移或基线漂移。 为避免这种情况,强烈建议在出现任何这些症状之前定期清洁色谱柱。 这个过程很简单,不需要修改通常的色谱设置。 当清洁不充分时,可能需要进行更彻底的处理,即再生,以避免丢弃色谱柱。
3.建议的清洁和再生程序
使用的清洁程序越多,所需的条件就越不严格。 应在色谱柱储存之前或色谱柱似乎堵塞时执行再生程序。 流速通常设置为低于分离期间的流速( 通常为 20% 至 50% )。
色谱柱体积( 包括填料体积 ),单位为 mL = π x [色谱柱半径,单位为厘米] 2 x [色谱柱长度,单位为厘米]
色谱柱
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较好的清洁程序
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较好的再生程序
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Silia Chrom 高效液相色谱柱
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- 设置流量( 通常的 20% 到 50% ) - 用 2-3 倍柱体积的以下每种溶剂冲洗
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- 反吹色谱柱 - 设置流量( 通常的 20% 到 50% ) - 用 10 倍柱体积的以下每种溶剂冲洗
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反相柱 ( C18、C8、C4、C1、胺、氰基、苯基、PFP等 )
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- 水/乙腈 (95/5) 以去除缓冲液 - 水/乙腈 (5/95) - 分离过程中使用的流动相
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- 水/乙腈 (95/5) - 四氢呋喃 - 水/乙腈 (5/95) - 分离过程中使用的流动相
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正相柱 ( 胺、氰基、二醇等 ) 注意:切勿用水。
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- MeOH/CHCl 3 (50/50) - 乙酸乙酯 - 分离过程中使用的流动相
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- MeOH/CHCl 3 (50/50) - 异丙醇和乙酸乙酯 - 分离过程中使用的流动相
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非键合硅胶柱 ( 二氧化硅 )
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- 己烷、异丙醇和二氯甲烷 - 分离过程中使用的流动相
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- 己烷、异丙醇和二氯甲烷 - 分离过程中使用的流动相
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离子交换柱 ( SCX、SAX 等 )
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- 5 mM 磷酸盐缓冲液 pH 7.00 - 醋酸/水 (10/90) - 水、甲醇和水
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