色谱柱的清洁与再生
在色谱柱的溶剂入口端收集强吸附物质,在许多情况下,洗涤过程中使用反向流动是有益的。与人们普遍认为的相反,逆流永远不会损害填料良好的色谱柱。提到的流动方向通常是色谱柱*初填充的方向。请注意,不规则/无定形原始二氧化硅在逆流时可能会出现问题,因为可能会重新构造填充床。 当在这些不规则二氧化硅上反转流动时,应始终格外小心。
请检查我们针对不同固定相( 建议的再生程序, RP、NP、离子交换等 ) 并在这些程序后执行 CoA 色谱柱测试,如果原始压力恢复,以评估色谱柱性能/峰对称性。
清洗和再生程序
如果足够小心,就可以在很长一段时间内保持柱效和可靠性。 本节旨在提供有关有助于延长 HPLC 色谱柱寿命的不同程序的信息。
清洁与再生的区别
我们通常假设,分离后,柱或筒中*初存在的所有物质都已洗脱。运行后,在开始新的分离之前,用2-3柱体积的初始溶剂混合物清洗色谱柱。 但是,如果流动相成分的强度不足以在常规运行期间将其洗脱,则一些强烈保留在色谱柱上的杂质将在进样口处积聚。 发生这种情况时可能会出现一些不可忽视的问题:性能损失、背压增加、峰拖尾、保留时间偏移或基线漂移。 为避免这种情况,强烈建议在出现任何这些症状之前定期清洁色谱柱。 这个过程很简单,不需要修改通常的色谱设置。 当清洁不充分时,可能需要进行更彻底的处理,即再生,以避免丢弃色谱柱。
再生议建的清洁和程序
使用的清洁程序越多,所需的条件就越不严格。 应在色谱柱储存之前或色谱柱似乎堵塞时执行再生程序。 流速通常设置为低于分离期间的流速( 通常为 20% 至 50% )。
色谱柱体积( 包括填料体积 ),单位为 mL = π x [色谱柱半径,单位为厘米] 2 x [色谱柱长度,单位为厘米]